样本接收
流式样本制备与处理
抗体标记
荧光抗体孵育与染色
上机检测
流式细胞仪检测与分选
数据分析
FlowJo 专业数据分析
什么是流式细胞术？
流式细胞术（Flow Cytometry, FCM）是运用流式细胞仪对单个细胞或微粒进行快速、多参数定量分析和分选的高通量生物技术。样品经荧光素标记后，以液流形式通过激光检测区，通过检测散射光信号（Forward Scatter, FSC 和 Side Scatter, SSC）及荧光发射信号，实现对细胞或颗粒的光谱鉴定、细胞分选与精准计数。
上海本地流式细胞实验平台，配备多台高端流式细胞仪（Beckman Coulter CytoFLEX / BD LSRFortessa），可提供从样本处理、抗体染色到数据采集与分析的全流程服务，覆盖科研与临床前研究各类需求。
主要检测项目
细胞周期分析
PI / BrdU 染色检测 G0/G1, S, G2/M 各期比例
细胞凋亡检测
Annexin V/PI 双染、JC-1、Caspase 活性检测
表面标记物
CD 分子等多色流式panel检测细胞亚群
细胞内染色
细胞因子（IFN-γ、TNF-α 等）胞内流式检测
线粒体功能
JC-1 / TMRE 检测线粒体膜电位 (MMP)
活性氧检测
DHE / DCFH-DA 检测细胞 ROS 水平
细胞分选 (FACS)
荧光激活细胞分选，高纯度目标细胞亚群
细胞杀伤检测
CFSE / CD107a 脱颗粒检测细胞毒性
技术平台详情
流式细胞术主要利用荧光标记的抗体检测蛋白表达水平，或结合特定细胞分子的荧光染料（如 PI 与 DNA 的结合）进行功能分析。
应用场景
- 细胞表面标记物（Surface Markers）鉴定 — 利用荧光素标记的 CD 系列抗体（如 CD3, CD4, CD8, CD19, CD34 等）定性或定量分析特定细胞类型
- 胞内蛋白表达检测 — 检测转录因子（Foxp3, Bcl-2）、细胞因子（IL-2, IL-6, TNF-α, IFN-γ）等胞内分子水平
- 细胞周期分析 — 通过 PI 或 Hoechst 33342 染色，分析细胞周期各时相（G0/G1, S, G2/M）的分布比例
- 细胞凋亡评估 — Annexin V/PI 双染法区分早期凋亡与晚期凋亡/坏死细胞；Caspase-3 活性检测
- 线粒体膜电位检测 — JC-1 或 TMRE 染料检测线粒体功能状态，评估细胞健康度与凋亡早期变化
- 活性氧（ROS）水平测定 — DHE、DCFH-DA 等染料检测细胞内氧化应激水平
- 细胞增殖检测 — CFSE 染料追踪细胞分裂代数，EdU 掺入法检测 DNA 合成
- 荧光激活细胞分选（FACS） — 根据表面/内部标记分离高纯度目标细胞群，供下游培养或组学分析
标准实验流程
样本收集与制备
收集细胞（悬浮细胞或消化后的贴壁细胞）或组织单细胞悬液，根据样本类型选择合适的制备方法（酶消化、研磨等）。
荧光抗体孵育与染色
选择适用的荧光素偶联抗体（单色至 18 色 panel），优化抗体稀释比例与染色方案，进行表面染色或胞内染色（需固定破膜）。
流式上机检测
使用 BD LSRFortessa / CytoFLEX 等仪器进行样本采集，设置合适的电压与补偿，运行待测样本与同型对照、FMO 对照。
数据分析与报告
使用 FlowJo v10 / FCS Express 等专业软件进行圈门、补偿调节、统计分析，生成直方图、散点图与统计表格报告。
样本要求
- 细胞样本：细胞数 ≥ 1×10⁶ cells/管，悬浮或消化后成单细胞悬液
- 全血样本：EDTA 抗凝管采集，2 mL 以上，4°C 运输
- 组织样本：新鲜组织块（≥ 100 mg），PBS 清洗后立即送检或液氮速冻
- 样本需明确标记信息，包含：样本编号、来源物种、检测指标、抗体品牌偏好（如有）
数据交付标准
提供原始流式数据文件（.fcs 格式），FlowJo 分析报告（含圈门策略、统计柱状图、原始数据散点图），以及完整的实验记录与方法说明。可根据期刊要求提供符合 MIFlowCyt 规范的数据。